链霉亲和素-巯基(Streptavidin-Thiol)是一种经过化学修饰的链霉亲和素,通过在链霉亲和素的分子结构上引入巯基(-SH)功能团免费配资系统,使其能够进一步与其他分子或表面进行共价连接。以下是对其的详细介绍:
一、基本性质
分子量:通常为60kDa。 溶解度:在适当的溶剂中具有良好的溶解度,如1mg/ml,便于实验操作和应用。 状态:固体/粉末/溶液。 纯度:一般达到95%以上。 储存条件:建议在4℃或-20℃避光保存,以防止巯基氧化和蛋白质变性,保存时间通常为1年。链霉亲和素-巯基,Streptavidin-SH
二、化学反应活性
高亲和力:链霉亲和素-巯基保留了链霉亲和素对生物素的高特异性和高亲和力,能够与生物素形成稳定的结合。 巯基反应活性:巯基具有较高的化学反应活性,能够与多种含有亲电基团的分子发生反应,如与马来酰亚胺基团发生特异性的迈克尔加成反应,还能与金、银等金属表面形成稳定的化学键。 可交联性:引入的巯基可与含活性醛基、氨基或其他巯基的分子发生交联反应,形成稳定的共价键。展开剩余67%三、应用领域
生物偶联实验:
科研人员可以利用链霉亲和素-巯基的巯基与修饰有马来酰亚胺的生物分子或材料进行偶联,然后借助链霉亲和素与生物素的结合,实现对目标生物分子的固定、分离或检测。表面修饰:
可用于修饰金纳米颗粒、电极、微孔板等,通过巯基与金等表面形成稳定的共价键,从而改变这些表面的生物相容性和反应性。免疫检测与生物传感:
可与生物素标记物形成高亲和力结合,用于ELISA、免疫荧光检测等。药物递送:
通过巯基-马来酰亚胺偶联,可将链霉亲和素结合到纳米颗粒或抗体上,实现靶向药物递送。纳米生物技术:
用于金纳米粒子、量子点表面的功能化修饰,广泛用于生物成像和传感器开发。四、制备方法
材料准备:准备链霉亲和素和巯基修饰试剂(如N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯,SPDP)。 溶解与混合:在PBS缓冲液中溶解链霉亲和素,配制适当浓度;将SPDP溶解在适量的DMSO中,制备高浓度的修饰试剂溶液。 反应:将SPDP溶液缓慢加入链霉亲和素溶液中,维持反应体系的pH值在7.5左右,室温下反应1~2小时。SPDP的NHS部分与链霉亲和素上的氨基反应,形成二硫键。 还原:向反应混合物中加入还原剂(如DL-二硫苏糖醇DTT或三(2-羧乙基)膦TCEP),断开二硫键,释放出巯基(-SH)。反应在室温下进行1小时。 纯化与保存:通过透析或凝胶过滤去除未反应的修饰试剂和还原剂,得到纯化的链霉亲和素-巯基。将纯化后的链霉亲和素-巯基溶液分装,并低温保存(如4℃或-20℃),以防止巯基氧化。温馨提示:仅用于科研,不能用于人体!
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